实验方法:
eSpCas9 mRNA和靶向TRAC位点的sgRNA按照1:1的质量比混合,并通过tcy8722太阳集团LP01-LNP (2.4 ug of RNA/LNP)和脂质体制剂包装后递送至HEK293T细胞。分别在第3天和第5天裂解细胞,通过PCR和Sanger测序检测编辑效率。
实验结果:
tcy8722太阳集团LP01-LNP组的编辑效率可高达97%,远高于脂质体组的编辑效率。
* POI(Point of Interest):实际粒径与理论粒径相差不超过±20 nm,不同LNP配方粒径存在差异
tcy8722太阳集团具备完整的IVT mRNA制备流程:从基因合成到LNP包装
密码子优化 /
UTR优化设计
基因合成
质粒制备及线性化
线性mRNA / 环状RNA / 自复制RNA制备
脂质纳米粒(LNP)
递送
tcy8722太阳集团 LNP 平台在 mRNA 递送中展现了优异性能:颗粒形态均一、空壳率低,转染效率高,并且具备出色的体内递送效果。
tcy8722太阳集团 LNP 在冷冻电镜(cryo-EM)表征中呈现出完整均一的颗粒形态
tcy8722太阳集团 LNP 空壳率低(<2%).
tcy8722太阳集团 LNP 相较于常规转染试剂展现出更优的转染效率
将 10 ng EGFP saRNA 分别通过 LNP(SM102)或 Lipofectamine™ MessengerMAX™(Thermo)转染至 HEK293T 细胞。转染 48 小时后,通过荧光显微镜检测EGFP 信号,并使用 ImageJ 软件进行定量分析。
tcy8722太阳集团 LNP 在小鼠中表现出优异的体内递送效果
将包载 Fluc mRNA 的 LNP(SM102)以 0.25 mg/kg 的剂量对小鼠进行静脉(左)或肌肉注射(右)。给药 8 小时后,小鼠通过腹腔注射100 μL的30 mg/mL D-荧光素,随后使用 IVIS 成像系统采集图像并评估总生物发光信号
tcy8722太阳集团推出了一系列新型 LNP 配方,采用独特的脂质组成,在体外和体内实验中均表现出色,其性能与 SM102、ALC0315 等主流LNP配方表现相当,甚至在部分应用场景中表现更优。这些新一代 LNP 不依赖传统可离子化脂质,并展现出良好的组织/细胞靶向潜力,为 mRNA 递送、疫苗开发、基因编辑以及细胞治疗等应用提供了更具优势的选择。
实验方法:
实验结果:
补充信息:
| 项目 | 检测方式 | 检测标准 | 研究级 - 标准 | 研究级 – 升级 |
|---|---|---|---|---|
| 外观 | 视觉观测 | 澄清无异物 | ||
| 终浓度 | RiboGreen荧光染料检测 | 0.1 – 0.4 mg/mL | ||
| 包封效率 | RiboGreen荧光染料检测 | > 85% | ||
| 包封RNA的完整性 | 毛细管电泳 | > 75% | ||
| 粒径 | 动态光散射 | POI ±20 nm , 65 - 125 nm | ||
| 多分散系数(PDI) | 动态光散射 | < 0.2 | ||
| Zeta电位 | 激光多普勒电泳 | ± 15.0 mV | ||
| PH | PH试纸/PH计 | 7.4 ± 0.5 | ||
| 内毒素 | 半定量 | < 4EU/ml | ||
| 内毒素 | 定量 | < 4EU/ml | ||
| 生物负载 | 直接接种 | 72小时内不生长 |
实验方法:
eSpCas9 mRNA和靶向TRAC位点的sgRNA按照1:1的质量比混合,并通过tcy8722太阳集团LP01-LNP (2.4 ug of RNA/LNP)和脂质体制剂包装后递送至HEK293T细胞。分别在第3天和第5天裂解细胞,通过PCR和Sanger测序检测编辑效率。
实验结果:
tcy8722太阳集团LP01-LNP组的编辑效率可高达97%,远高于脂质体组的编辑效率。
实验方法:
采用脂质体Lipofectamine™ MessengerMAX™ (ThermoFisher)或TransIT® (Mirus)和tcy8722太阳集团SM102-LNP 递送100ng或200ng的eGFP mRNA (100% N1-methyl-pseU修饰) ,48小时后用流式细胞仪检测eGFP表达量。
实验结果:
tcy8722太阳集团SM102-LNP组的蛋白表达量更高,且表达蛋白的细胞比例更高。
实验方法:
给Balb-C小鼠肌肉注射4种不同LNP制剂包封的Fluc mRNA(100% N1-methyl-pseU 修饰),剂量为0.25mg/kg。通过小鼠全身荧光成像检测Fluc mRNA的表达量和分布。
实验结果:
实验方法:
给Balb-C小鼠静脉注射2种不同LNP制剂包封的Fluc mRNA(100% N1-methyl-pseU 修饰),剂量为0.3mg/kg。通过小鼠全身荧光成像检测Fluc mRNA的表达量和分布。
实验结果:
什么是脂质纳米颗粒(LNPs)?
脂质纳米颗粒(LNPs)是可以自组装成球形结构的天然或合成分子。LNPs通常由脂质层组成,形成了一个外壳,内部是可用于输送药物或其他药物的隔离区域。由于其能够保护药物分子不降解并提高其生物利用度的能力,LNPs作为药物输送系统越来越受到关注。
LNPs还可以设计为靶向特定细胞或组织,实现更精确的药物输送。LNPs已被用于各种应用,包括递送基于RNA的治疗剂,如mRNA疫苗。LNPs的脂质层可以与细胞膜融合,使封装的RNA进入细胞并发挥其治疗作用。LNPs也被研究作为其他类型药物(包括小分子和蛋白质)的潜在输送系统。
mRNA LNP如何用于体外细胞转染?
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